Isolation and characterization of mitochondrial DNA from the endangered white-clawed crayfish Austropotamobius pallipes pallipes, Lereboullet, 1858

Isolation et caractérisation de l'ADN mitochondrial chez l'écrevisse à pattes blanches Austropotamobius pallipes pallipes, Lereboullet, 1858, espèce menacée

Laboratoire de Biologie Animale, URA CNRS n° 1975, Université de Poitiers, 40 avenue du Recteur Pineau, 86022 Poitiers Cedex (France).

Received: 29 March 1996
Accepted: 20 May 1996

Abstract

Mitochondrial DNA (mtDNA) variation in the white-clawed crayfish, Austropotamobius pallipes pallipes, was examined by restriction endonuclease analysis of samples obtained from three geographical locations representing two very différent habitats : the Crochatiere and the Magot for brooks and the Pinail for ponds. This study used a new type of molecular marker in crayfish. The method of mtDNA extraction was not based on the clear lysate method or on ultracentrifugation and used no end-labelling détection. It is discussed according to the literature about marine crustaceans. MtDNA was digested with 6 endonucleases. The molécule size of the mtDNA of the white-clawed crayfish was approximately 17750 ± 580 base pairs. Two restriction enzymes produced polymorphic digestion patterns, defining a total of three haplotypes (1-3). There was a shared haplotype 2 between individuals among the two brooks. The haplotype 3 was only found in individuals obtained from ponds of Pinail.

Résumé

La variabilité de l'ADN mitochondrial (ADNmt) chez l'écrevisse à pattes blanches, Austropotamobius pallipes pallipes, est examinée par l'utilisation d'endonucléases de restriction à partir d'échantillons issus de trois sites caractérisant deux types d'habitats : la Crochatière et le Magot pour les ruisseaux et le Pinail pour les mares. Cette étude met en oeuvre un nouveau type de marqueur moléculaire chez les écrevisses. La méthode d'extraction de l'ADNmt n'est pas basée sur la méthode de lyse alcaline ou sur des ultracentrifugations et n'utilise pas de marquage terminal. La technique d'extraction est discutée par rapport aux méthodes employées chez les crustacés marins. L'ADNmt est digéré à l'aide de six endonucleases. La taille de la molécule d'ADNmt chez l'écrevisse à pattes blanches est approximativement de 17750 ± 580 paires de base. Deux enzymes de restriction donnent des profils de restriction polymorphes, définissant trois haplotypes (1-3). L'haplotype 2 est présent dans les populations provenant des deux ruisseaux. L'haplotype 3 est exclusivement trouvé chez les écrevisses provenant des mares du Pinail.